MC-Transaction on Biotechnology, 2011, Vol. 3, No. 1, BTHM2011 Conference Note 1
褐變對蘿蔔抗氧化能力的影響
苑舉民、李宗遠、許琇婷、李涴婷、蕭雯青、魏瑋辰、黃琨灃、梁致遠*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:梁致遠[ liang121@mail.mcu.edu.tw ]
收稿:2011-3-1 接受:2011-3-6
中文摘要
以蘿蔔進行羰胺縮合反應,發生褐變作用,產生黑蘿蔔並探討過程中的變化。結果表明,以加4%糖醃製並經褐變轉為黑蘿蔔的多酚類含量,總還原力及清除DPPH 的能力都為最高。不加糖醃製且經褐變的黑蘿蔔的處理,其多酚類含量、總還原力及清除DPPH的能力都較冷凍乾燥的蘿蔔為高。在DNA 的保護作用上,冷凍乾燥處理及市售醃製二年蘿蔔都具保護作用。
緒 論
蘿蔔(Raphanus sativus L.)為十字花科植物。《本草綱目》記載: 「蘿蔔可生可熟,可菹可醬,可糖可臘,可飯,乃蔬中之最有利益者,而古人不深詳之,豈因其賤而忽之耶?」。蘿蔔生熟皆可食,多以熟食或醃製成蘿蔔乾食用。以蘿蔔與鹽經清洗及醃製,放置於陶甕中,經過多年後完成即完成黑色的老菜脯,在客家族群中,認為陳年老菜脯具有多方面的療效,本實驗採用傳統的烘箱,透過溫度及溼度控制,讓碳水化合物與胺基酸產生羰胺縮合,完成蘿蔔褐變反應,將白色蘿蔔轉化成黑蘿蔔,本研究並討論轉化過程中抗氧化能力的變化及探討對DNA 的保護作用。
材料與方法
白蘿蔔洗淨,切成約二公分的丁塊狀,秤總重8%的盬,放置三天並使之出水,將蘿蔔取出,用布包住,以石頭壓出水份至原本1/4 重量,加入總重的4%的白砂糖,裝罐完成。處理後的蘿蔔在85℃、85%的濕度下加速作用18 天,並以85℃烘乾。各處理如下:(a)新鮮的蘿蔔,經冷凍乾燥備用(b)不加糖的蘿蔔在85℃、85%下作用18 天(c)加4%糖的蘿蔔在85℃、85%的濕度下作用18 天(d)市售已醃 製二年的蘿蔔,冷凍乾燥備用。測試總多酚含量、還原力、清除DPPH 能力及DNA 保護能力(1)。
結 論
各種處理的蘿蔔之總多酚量、還原力及清除DPPH 能力,以4%糖醃製經碳胺縮 合處理後的黑蘿蔔,其量最高,其次為不加糖醃製的黑蘿蔔,經冷凍乾燥後的蘿 蔔及市售二年醃製的處理為最少。根據核醣傷害(Ribose degradation)研究,在Fenton 反應下,以冷凍乾燥及市售二年醃製蘿蔔的處理較有羥基自由基清除效 果。將處理後的蘿蔔作DNA 的保護實驗,結果顯示,冷凍乾燥處理的蘿蔔及市 售二年醃製的蘿蔔都具有DNA保護作用,在這兩種處理下,部份受損DNA(relaxed DNA)回復成為完整DNA(supercoiled plasmid DNA),證明蘿蔔具有清除自由基效果。
參考文獻
[1] Hou et al., Biochemistry, 2008, 47:5493.
MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c2 Epitope survey on Influenzaviruses
Survey of conservative epitopes existed on Type A influenza viruses
劉宗祺、張猷忠*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:張猷忠[ d8016@mail.mcu.edu.tw ]
收稿:2011-3-9 接受:2011-3-12
中文摘要
A 型流感病毒常因突變而造成序列上的些微差異,稱為Antigen drift。若變異性較大,則容易造成大的流行。本實驗希望透過尋找在A 型流感病毒上,保守度較高的抗原決定位,來發展長效期疫苗。目前發現有3 段區域出現率高,可用於試 製疫苗。
緒 論
A 型流感病毒是透過Hemagglutinin(HA)去辨認宿主細胞的接受器,進而感染宿主細胞。由於A 型流感病毒的HA 序列變異性高,常需每年重新製備新的疫苗[1, 2], 所以希望藉由分析HA 序列的變異性,找出一些保守度高的抗原決定位,可涵蓋歷年流感病毒,用以達到設計長效疫苗的目的。因此進行HA 序列的分析,來預測抗原決定位,再從中找出不易變的區域,並利用Protein Data Bank(PDB)查出此抗原決定位序列的位置是否為裸露的部份,才選用為設計長效疫苗的胜肽。
材料與方法
透過NCBI 資料庫的病毒序列,再從中挑選HA 序列建構相關的A 型流感病毒資 料庫,然後利用Perl程式語言進行分析及預測抗原決定位,再從預測的抗原決定位去挑選出現較多次的抗原決定位,以出現較多的區域與WHO所公佈現行的流感疫苗株進行比對,用以確保選定的抗原決定位是有效的。
結 論
在目前的實驗中發現有3 段區域出現的機率是比較多的,分別為GLFGAIAGF、LFGAIAGFI、EIEGGWPGL,依序將序列與WHO比對疫苗株的可行性及PDB觀測結構位置是否是在蛋白質的外側是有作用的區域,確認所選擇的區域在疫苗的選用是可行的。
參考文獻
[1] Smith, et al. Science, 2004, 305: 371.
[2] Liao, et al, Nucleic Acids Res, 2009, 37:W643
MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c3
Screening and Cloning of the Virulence Factors spvABCDR of Salmonella spp.
陳柏蓉、陳怡婷、黃鈺真、許豪陞、邱俊閔、張猷忠*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:張猷忠[ d8016@mail.mcu.edu.tw ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-12
中文摘要
spv 基因為salmonella plasmid virulence 在沙門氏菌的質體上,帶有毒性可增加存活率並且提高對宿主細胞的感染力。可分為兩種transcriptional units:spvR、spvABCD。本實驗調查既有的26 株salmonella serotypes 是否具有spv 基因群。萃取出plasmid 後,利用PCR及TA cloning,並分別在S. choleraesuis、S. dublin、S. enteritidis、S. typhimurium、S. panama、S. typhi 等salmonella serotypes 中有發現spvRABCD 基因,將進一步定序並分析其序列。
緒 論
spvR基因可做為正向調節蛋白,在進行轉錄時調控下游spvABCD 基因表現(1, 2)。spvA 基因則會影響產生負調控spvR 基因,因為兩者會相互競爭重疊在Leucine-responsive regulatory protein (Lrp)位置上,Lrp 可結合在spvR上游,當做spvABCD 操縱子,因此而相互抑制。spvB蛋白是ADP-ribosylating enzyme,能夠影響宿主細胞的肌動蛋白聚合,進一步的影響phagosome 與lysosome 的融合,
但其致病機制仍不甚清楚。spvC (salmonella plasmid virulence C)屬於一種Phosphothreonine lyase ,在宿主中會產生Phosphothreonine lyase activity反應,進而去影響MAPK (Mitogen-activated protein kinase)傳訊路徑(3)。導致宿主細胞無法透過MAPK 路徑來傳遞免疫信號,提高沙門氏菌感染宿主細胞的效率。如果spvD 缺失,spvC 會增強基因表現量去補償spvD 的功能,我們可以得知spvD 和
致病力是有關聯性的,但是機制仍然未查明確。
材料與方法
首先,參考沙門氏菌的spvABCDR 基因設計一段引子,接著抽取實驗室現有的26 株沙門氏菌的質體DNA,透過PCR 的方式,利用已設計好的引子去夾出目標基因,最後再將目標基因接合於載體上,送入勝任細胞Escherichia coli strain JM109中,使得細胞之遺傳性狀發生改變。之後,再次抽取質體進行PCR,確認目標基因是否成功選殖出來,進而去定序分析。
結 論
經過實驗結果,我們所探討的沙門氏菌spvABCDR 基因其序列大小分別約為768 bp、1800 bp、725 bp、651 bp、894 bp。抽取實驗室現有26 株不同血清型沙門氏菌的質體DNA,透過PCR 方式,利用已設計的引子確切有夾出目標基因的結果如下:
spvR: S.choleraesuis 3、S.dublin 1、S.enteritidis 92,93spvA:S.dublin 2、S.derby 03、S. enteritidis 72、S.typhi 6 spvB : S.dublin 1、S.enteritidis 94、S.typhimurium 3,4,8、S.typhimurium LT2 spvC:S.choleraesuis 3,4,6,7、S.dublin 1,2、S.derby 1,2,3,4,5、
S.enteritidis 92,93,94,95,96、S.panama 1,2,3、S.typhi 8、S. typhimurium LT2 SpvD: S.dublin 1,2、S.choleraesuis 3,4,5,6,7、S. enteritidis 、
S.typhimurium LT2 上述實驗結果還需經定序確認分析,以便進一步做沙氏桿菌流行病學及致病力研 究。
參考文獻
[1] Fang, et al, J Bacteriol, 1991, 173:6783.
[2] Krause, et al, J Bacteriol, 1992, 174:4482.
[3] Schroeder, et al, PLoS Pathog, 2010, 6:e1001002.
MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c4
高粱萃出物健康食品開發
高啟芸、鄭建瑋*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:鄭建瑋[ochien@gmail.com ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-12
中文摘要
高粱穀物中含有許多有益人體健康的酚類化合物,主要存在於高粱穀物表皮或麩皮,且其抗氧化活性較其他各類穀物高;又高粱穀物中所含之酚類化合物可降低心血管疾病風險,其膳食成分包括植物固醇及甘蔗原素亦較其他穀物更能有效地降低膽固醇。本研究係將高粱穀物與水依不同比例、溫度及時間各種組合進行蒸煮,並將其乾燥成粉末,分析其總酚含量及抗氧化能力,最後以動物實驗進行降低血液中膽固醇濃度測試,將其開發成為能夠降低膽固醇並預防心血管疾病之健康食品。
緒 論
現代人日常生活作息及飲食習慣改變,造成許多心臟血管方面疾病之發生率及死亡率逐年上升,若欲降低此類疾病發生風險,則必須藉由改善日常飲食以降低血液總膽固醇(Total cholesterol)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-cholesterol)濃度並提升高密度脂蛋白膽固醇(HDL-cholesterol)濃度為主要對策。根據各種流行病學數據指出,攝取全穀類食物如:小米、小麥、大麥、黑麥、燕麥及高粱等,可顯著地降低心血管疾病的死亡率。其中高粱穀物之膳食成分較其他穀物更能有效地降低膽固醇,且其抗氧化活性亦高於其他穀物,因此,高粱穀物具有幫助人們預防心血管疾病以及促進身體健康之潛力。本研究目的除了將高粱以不同條件做萃取找出其總多酚含量及抗氧化活性最高之最佳條件外,並將其開發成為具有降低膽固醇以及預防心血管疾病之保健功效
的健康食品。
材料與方法
將紅高粱與水依照各種不同比例、溫度及時間蒸煮,蒸煮完後之過濾液乾燥成粉末,即為高粱萃出物。接著測量其總多酚含量、還原力及DPPH自由基清除能力。最後,將最佳條件組合所得之高粱萃出物以倉鼠為模式動物進行血液膽固醇分析,包括三酸甘油脂(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)以及低 密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)濃度。
結 論
紅高粱中的有效成分經由各種條件組合萃出後,其總多酚含量及抗氧化活性也因不同萃出條件而有所不同,其中高粱與水以1:8 之比例於65℃蒸煮並恆溫2 小時所得高粱萃出物之總多酚含量及抗氧化活性為最高,此即做為本研究之最佳萃出條件。此外,根據結果可知高粱萃出物之總多酚含量與抗氧化活性之間具有正相關性。
參考文獻
[1] Awika, et al., Phytochemistry, 2004, 65:1199.
[2] Dykes, et al., J Agric Food Chemistry, 2005, 53:6813.
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MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c5
LED光照與培養基組成對蛹蟲草液態發酵代謝產物之影響
陳郁雯、梁致遠、鄭建瑋*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:鄭建瑋[ochien@gmail.com ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-12
中文摘要
本研究目的在於,培養基組成與LED 光照對蛹蟲草液態發酵產物生成之影響。研究時,利用搖瓶液態培養,找出最適條件後,將製程放大至發酵槽,從而找出其中最佳之生長控制條件,以提高北蟲夏草菌絲體中機能性成分比例,並等同於搖瓶液態培養的分析測定藉以相互驗證評估。為了評估蛹蟲草菌絲體之安全性,依衛生署健康食品安全性評估法進行毒性試驗。
緒 論
冬蟲夏草,一向以來被視為一種珍貴滋補的中藥材,在日漸枯竭下,由於冬蟲夏草尚無法人工培養,學術界與產業界莫不積極研究其他蟲草屬真菌中,是否有替代蟲草的菌種。蛹蟲草較無寄主專一性,與冬蟲夏草相比,人工培養容易,且生產成本低廉,雖然機能性成分組成與野生冬蟲夏草不完全相同,但相同的保健功效已經被多次證實,因此提升蛹蟲草液態生產的效率,並提升機能性成分含量,是當前重要的課題(1, 2, 3, 4) 。
材料與方法
所有的條件利用搖瓶液態培養,並分析其多醣濃度、還原力、清除DPPH自由基能力、超氧歧化酶(SOD)活性測定及使用高效液相層析分析機能性成分,如:蟲草菌素(Cordycepin or 3’-deoxyadenosine),找出最適條件後,將製程放大至發酵槽,控制培養基之組成份、攪拌速率、溫度、pH 值從而找出其中最佳之生長控制條件,以提高生產效率,並等同於搖瓶液態培養的分析測定藉以相互驗證評估。為了評估蛹蟲草菌絲體之安全性,依衛生署健康食品安全性評估法進行毒性試驗。
結 論
發現紅光培養在pH值方面,不同於其他光源的培養,猜測紅光培養可能會影響到蛹蟲草代謝生成的進行,且其菌絲體直徑大小平均也都大於其他光源,但可能會抑制多醣的生成。抗氧化測定方面,發現培養基的組成可能是影響其能力最大的可能因素,隨著米與米糠比例的不同,米糠越多,還原力測定及清除DPPH自由基能力越好,猜測其米糠影響菌絲體能力為最可能的因素,之後會將米與米糠分別做還原力測定及清除DPPH自由基能力以釐清其抗氧化能力為菌絲體本身的還是菌絲體收成時參雜到的米與米糠。多醣測定方面,整體光源來看可以發現藍光明顯會抑制多醣的生成。之後會將所有測定都完成以全面性評估,擇一條件後進行提升菌絲體效率生成的階段及細胞的測定。
參考文獻
[1] Das, et al., Fitoterapia, 2010, 910.
[2] Hung, et al., Thai Journal of Agricultural Science, 2009, 42:219.
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[4] Yu, et al., Carbohydrate Polymers, 2007, 70:430.
MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c6
柳丁陳皮抗氧化活性與機能性成份分析
陳叔豪、梁致遠、鄭建瑋*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:鄭建瑋[ochien@gmail.com ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-12
中文摘要
柑橘為臺灣重要的經濟果樹,栽種面積大約占有37,000 公頃,年產量約45 萬公噸,因此常常造成大量的柳丁皮廢棄,近年來常因產銷失調造成「果賤傷農」的陰霾。為了減緩這樣的情形,因此著手進行研究,分析柳丁皮的機能性成分。將柳丁皮以三種處理方式,來比較之間抗氧化物質含量及抗氧化能力之差異。
緒 論
柑橘類鮮果及果皮中含有豐富的機能性成分,如維生素C、類黃酮、酚酸、果膠質、類胡蘿蔔素、植物固醇類及葉酸等化合物。這些化合物具有抗氧化、抗癌、抗菌、降血脂和預防動脈硬化及心血管疾病(1, 2, 3)。本研究主要針對的柑橘類為柳丁,分析果皮部分的抗氧化能力及各項機能性成分。實驗中將新鮮柳丁皮做各種處理後乾燥製粉進行比較,藉由還原力測試、總多酚類測定及DPPH自由基清除能力等技術,測量出柳丁皮之抗氧化能力,且利用HeLa 細胞實驗測試是否具有良好的抗氧化能力,並進行動物實驗,測試柳丁皮對動物血脂濃度的影響,將果皮做最完善的利用。
材料與方法
新鮮柳丁皮直接置於55℃之熱風乾燥箱內烘乾16 小時。新鮮柳丁皮自然發酵一週後風乾,再置於55℃之熱風乾燥箱內烘乾16 小時。新鮮柳丁皮進行梅納反應(60℃,濕度85%),再置於55℃之熱風乾燥箱內烘乾16 小時,最後磨粉並妥善儲存。將處理的柳丁皮做還原力、總多酚、DPPH自由基清除能力及HeLa 細胞抗氧化測試等分析。將分析結果最佳之柳丁皮樣品進行動物血脂試驗,測試是否對血脂有所影響。
結 論
柳丁皮經過不同處理其抗氧化活性會有所改變,最後得到結果是以發酵過的柳丁
皮效果最佳。餵食倉鼠柳丁皮其總膽固醇濃度有顯著降低。證實了柳丁皮具有良
好的抗氧化活性及降血脂功效。
參考文獻
[1] Guimaraes, et al., Food Chem Toxicol, 2009, 48:99.
[2] Williams, et al., Food Chem Toxicol, 1999, 37:1027.
[3] Zhou and Su., Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52:6108.
MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c7
高粱萃取物之保健功能
周旻璇、鄭建瑋*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:鄭建瑋[ochien@gmail.com ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-12
中文摘要
高粱含有的酚類化合物大部分存在於高粱穀物外層的種皮,具有清除自由基的結構特徵。膽固醇,低密度脂蛋白(LDL) 俗稱是"壞"的膽固醇,是造成心血管疾病之主要原因。高密度脂蛋白(HDL)對心臟血管具有保護作用可降低心臟血管疾病之風險,俗稱"好"的膽固醇。此實驗之研究目的為選定高粱抗氧化能力最好的條件外,以此條件生產高粱萃取物進行動物實驗,探討高粱萃取物具有可有效降低膽固醇以及預防心血管疾病的保健功效。
緒 論
高粱含有的酚類化合物大部分存在於高粱穀物外層的種皮,具有清除自由基的結構特徵。膽固醇,低密度脂蛋白(LDL) 俗稱是"壞"的膽固醇,是造成心血管疾病之主要原因(1, 2, 3)。高密度脂蛋白(HDL)對心臟血管具有保護作用可降低心臟血管疾病之風險,俗稱"好"的膽固醇。此實驗之研究目的為選定高粱抗氧化能力最好的條件外,以此條件生產高粱萃取物進行動物實驗,探討高粱萃取物具有可有效降低膽固醇以及預防心血管疾病的保健功效。
材料與方法
品種為Sorghum bicolor (L.) Moench 的紅高粱。燉鍋、鐵鍋、壓力鍋、流體乾燥機、恆溫乾燥箱。出生6 至7 週之雄性敘利亞倉鼠。Reducing Power Assay、清除自由基能力、動物實驗、膽固醇測定。
結 論
高粱與ddH2O比例為1:8 時的抗氧化能力較好。以1:8、65℃、2小時的條件,抗氧化能力明顯最高。在烹煮以及烘乾的方法中,其中以鐵鍋烹煮出來的高粱萃取物,抗氧化能力比較高。烘乾方面,過濾出液體後,先置於恆溫乾燥機隔夜烘乾再放置於流體乾燥機,此抗氧化能力較高。在進行一個月的動物實驗後,抽取倉鼠之血液,檢測血清中之膽固醇。餵食一個月的高
粱萃取物後的倉鼠,LDL 有明顯的降低。相對於僅餵食一般飼料與膽固醇,LDL 數值則比較高,而以高粱穀物代替高粱萃取物餵食,HDL 值亦有增加,LDL 值則有下降。由此可得知,高粱萃取物具有可降低膽固醇之成分及功效。
參考文獻
[1] Awika, et al, Food Chem, 2004, 90:293.
[2] Menendez, et al, Food Chem Toxicol, 2005, 36:113.
[3] Ostlund, et al, Curr Opin in Lipidol, 2004, 15:37.
MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c8
乳酸菌的抗黴分析與應用
林郁軒、林志璋、徐偉婷、簡尉峰、陳奕伸*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:陳奕伸[yisheng@mail.mcu.edu.tw ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-12
中文摘要
本研究主要針對醬冬瓜之分離乳酸菌株進行對Trichophyton rubrum ATCC 22402的生長抑制效果評估,同時分析抑菌物質可能的成分並評估未來應用之可行性。
緒 論
台灣因氣候高溫多濕,容易罹患香港腳及富貴手等皮膚疾病。此類疾病多由紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)所引起,藥物治療雖能有效抑制紅色毛癬菌的生長,但部分類固醇藥物容易造成副作用。國外相關研究報告指出,部分乳酸菌能有效抑制真菌類微生物的生長(1, 2),而本實驗之主要研究目的為篩選出能抑制紅色毛癬菌之乳酸菌株,期望能應用於相關皮膚疾病的應用之上。
材料與方法
將乳酸菌以MRS medium 培養12 至24 小時後,以T. rubrum ATCC 22402 為指示菌,利Agar streak assay或Agar-well diffusion assay 進行篩選(3)。抑菌物質成分之簡易分析部分,是先以冷凍乾燥法製作濃縮上清液後,再分別透過pH值調整、高溫處理及Proteinase K處理等方式來分析其特性。在簡易應用上,設計將乾燥菌粉利用混合紫草及冰片與凡士林(Petrolatum),製成膏狀混合物後,測試抗菌效果是否依然存在,且塗抹於人體皮膚表面觀察是否會產生過敏現象。
結 論
實驗結果顯示W. paramesenteroides 862103菌株對T. rubrum ATCC 22402 具備最佳的抑菌效果,因此選擇該菌株進行後續的相關測試與分析。實驗結果指出20倍的濃縮培養液對T. rubrum ATCC 22402 可以達到穩定的抑菌效果。而抗菌物質本質之簡易分析部分,在經pH值中和後未能觀察到抑菌效果,但經Proteinase K 處理以及高溫處理過後仍保一定程度之抗性效果,故推測抗菌物質為非蛋白質本質之物質。此外,混合中藥材凡士林能增加實用上的附加價值,且不影響乳酸菌 生長並仍具抑菌效果。塗抹於皮膚表面並不會造成過敏,未來應能有一定的應用及開發潛力。
參考文獻
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MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c9
Axin複合體轉位的機制
李瑋珊、林重銘*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:林重銘[lin.chungming@gmail.com ]
收稿:2011-3-11 接受:2011-3-14
中文摘要
根據先前的研究,顯示此複合體運輸是透過微管,但是其機制到目前為止還不明確,因此這篇論文主要的研究目標在於探討 Axin 複合體轉位的機制。
緒 論
在 Wnt 訊息傳遞路徑中,Wnt 訊息傳遞分子可以調控不同階段的胚胎發育、細胞命運的決定及細胞的移動,而不正常的Wnt訊息也與癌症的形成有關(1, 2)。其中 MACF1 是Wnt 訊息傳遞路徑的成員之一,為一細胞骨架的連接蛋白,在Wnt 的存在下會幫助Axin 複合體從細胞質轉移到細胞膜上,其扮演極重要的角色(3)。因此想探討之間的關連性,利用實驗技術與科學的方法來驗證與探討其背後機制。
材料與方法
將MACF1 分成十個片段,送入動物細胞表現,並且利用免疫共沉澱的方法找出負責和運輸蛋白的鍵結區域。利用西方墨點法和免疫共沉澱法來驗證與探討其背後的機制為何。
結 論
根據西方墨點法和免疫共沉澱的實驗結果,獲得初步的實驗結果,定出MACF1負責和運輸蛋白之間交互作用的區域。找出負責彼此互相作用的區域之後,會接著研究Axin 轉位其背後的機制。
參考文獻
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MC-TB 2011 Vol 3, BTHM2011-c10
Screening and Cloning Salmonella Virulence Factors mig-5,artAB, and cdtB
何自強、周成恬、高意雯、廖思涵、張猷忠*
銘傳大學健康科技學院生物科技學系(台灣 桃園)
通訊作者:張猷忠[d80106@mail.mcu.edu.tw ]
收稿:2011-3-15 接受:2011-3-15
中文摘要
沙門氏菌含有許多種毒性基因,能於人類、家禽、家畜及野生動物之間相互感染,是全世界重要的公共衛生問題。我們主要研究的毒性基因為mig-5、artAB、和 cdtB。希望利用 PCR 技術在沙門氏菌選殖出 mig-5、artAB、和cdtB gene,並分析每株沙門氏菌的mig-5、artAB、和cdtB gene sequence 之異同。初步篩選PCR陽性在mig-5 有9 株、cdtb 有1 株、artA 有1 株、artB 有13 株。目前正進行基因選殖確認。
緒 論
artAB為ADP ribosyltransferase homologous genes (1)。ADP-ribosyltransferase toxin homologue gene 分成subunit A 和subunit B,artA 似霍亂毒素subunit A 功能,影響G protein,使cAMP不正常增加,artB則似霍亂毒素subunit B功能,主要為轉送artA gene 產物進宿主細胞(1, 2)。cdtB gene 為產生CDT 的其中一種gene,英文全名為cytolethal distending toxin,為cdtA、cdtB和cdtC gene 所產生的次單體組成。CdtA 和CdtC將CdtB送入宿主細胞核,而cdtB gene 所產生的CdtB則是破
壞宿主的DNA (3)。mig-5 是沙門氏菌plasmid兩大毒性因子之一,又被稱為是macrophage inducible gene (4),當沙門氏菌被巨噬細胞吞噬時,會製造carbonic anhydrase (2)。科學家推斷,carbonic anhydrase可能對於細菌的生存或者感染宿主細胞有一定程度上的幫助。
材料與方法
首先先設計一段primers,培養26 株的沙門氏菌,利用phenol/ chloroform method 抽取genomic DNA 以及Alkaline-SDS method 來抽取plasmid DNA,之後利用PCR來擴增DNA 的量,並用酵素作用和膠體電泳來確認PCR 產物是否正確無誤,確認之後經由幾次的酒精沉澱將雜物去除,進行T/A cloning 後,並利用事先使用大腸桿菌E.coli (JM109)製作而成的勝任細胞進行轉形作用,再將轉形完成的勝任細胞去培養後,抽取plasmid DNA,使用膠體電泳確認是否轉型成功,即可送至廠商定序。
結 論
初步篩選PCR 陽性在mig-5 有9 株、cdtb 有1 株、artA 有1 株、artB有13 株。目前正進行基因選殖確認,而所得序列也將可用於流行病學及致病力的分析。
參考文獻
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